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    ELISA試劑盒切片組織處理實驗步驟

    發(fā)布時間: 2017-12-05  點擊次數(shù): 1675次

    ELISA試劑盒實驗不建議固定組織24小時以上,因為固定過度可能導(dǎo)致抗原的遮蔽。
    組織在固定后可轉(zhuǎn)移至酒精中,直至包埋過程。
    因為石蠟與水是不混溶的,ELISA試劑盒所以組織在加入熔化的固體石蠟前必須脫水。
    脫水是通過浸潤在濃度遞增的酒精中而實現(xiàn)的。
    這種方法逐步改變疏水性,讓細(xì)胞傷害zui小化。脫水之后,組織與二甲苯共同孵育,以去除任何殘留的酒精。
    仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。
    通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。
    離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
    仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
    固定可通過灌注或解剖后立即浸潤來實現(xiàn),一般需要4-24小時。
    石蠟一般加熱到60?C進(jìn)行包埋,隨后經(jīng)過一夜硬化。
    血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
    仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
    尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
    ELISA試劑盒利用切片機(jī)用鋒利的刀片將組織切成超薄的切片。切片在顯微鏡載玻片上干燥,并長時間室溫儲存。
    組織切片在開始IHC/ICC步驟之前必須再水化。
    研究人員發(fā)現(xiàn),當(dāng)實驗鼠的食物中含有較多糖分時,由此產(chǎn)生的葡萄糖會妨礙這種細(xì)胞的功能,使其分泌下丘腦泌素的量減少,從而讓實驗鼠易困。
    如果食物中含有較多的蛋白質(zhì),ELISA試劑盒由此產(chǎn)生的則能起到相反的效果,有助實驗鼠保持清醒。
    仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
    組織在用石蠟包埋之前必須固定。
    細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。
    標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。
    若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
    不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    石蠟包埋為長期保存組織樣本提供了合適選擇。
    血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
    仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
    ELISA試劑盒石蠟是組織包埋的*也是zui常用的物質(zhì)。

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