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    ELISA抗原(抗體)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)的影響力

    發(fā)布時(shí)間: 2015-06-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1073次

        ELISA是一種免疫測(cè)定,一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇。在免疫測(cè)定中,抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。在臨床檢修中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì),ELISA實(shí)驗(yàn)抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇,或稱(chēng)為表位。免疫測(cè)定是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。
        IgG和IgM的重鏈分別稱(chēng)為γ鏈和μ鏈??贵w是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤模笑屎挺藘煞N型別。Ig分五類(lèi),即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM.Ig由兩個(gè)輕鏈(L)和兩個(gè)重鏈(H)的單體組成。五類(lèi)Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同,這決定了它們的抗原性也不同。 
         IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個(gè)區(qū)段,其中兩個(gè)相同的區(qū)段稱(chēng)抗原結(jié)合片斷(Fab)。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位,只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配,發(fā)生特異性結(jié)合,是抗體專(zhuān)一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。每個(gè)Fab都保留結(jié)合抗原的能力,ELISA實(shí)驗(yàn)但只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn),是單價(jià)的,與抗原結(jié)合后不泛起凝集或沉淀。另一區(qū)段稱(chēng)Fc段,無(wú)抗體活性,但具有IgG*的抗原性。重鏈和輕鏈的N真?zhèn)€氨基酸排列順序因各種抗體而異,稱(chēng)為可變區(qū),分別用VH和VL表示。
        如將多種抗原或含有多個(gè)抗原決定簇的抗原注入機(jī)體,ELISA實(shí)驗(yàn)則將由多系的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的多種抗體,這些抗體均存在于免疫血清中。含有抗體的血清稱(chēng)為抗血清。免疫測(cè)定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。將免疫的脾細(xì)胞與小鼠腫瘤細(xì)胞融合,分離雜交瘤細(xì)胞,接種于小鼠腹腔,產(chǎn)生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。每一系B細(xì)胞只產(chǎn)生針對(duì)某一抗原決定簇的抗體。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞可在體外與繁殖力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。將單個(gè)雜交瘤細(xì)胞分離,在體內(nèi)或體外培養(yǎng)而分泌的抗體單克隆抗體。單克隆抗體僅針對(duì)一種抗原決定簇,具有很高的特異性。

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