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    ELISA試劑盒技術(shù)運(yùn)用

    發(fā)布時(shí)間: 2014-07-01  點(diǎn)擊次數(shù): 894次

    利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的樣本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液,陰道分泌物等,這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。
    ELISA試劑盒規(guī)格為:96T/48T     
    保存溫度:2~8°  
    適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

    ELISA試劑盒技術(shù)中的抗原與抗體的反應(yīng)
    抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類(lèi),即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為 IgG和IgM。Ig由兩個(gè)輕鏈(L)和兩個(gè)重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?,?kappa;(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類(lèi)Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同,這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱(chēng)為γ(gamma)鏈和μ(mu )鏈。
    重鏈和輕鏈的 N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異,稱(chēng)為可變區(qū),分別用VH和VL表示。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位,只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配,發(fā)生特異性結(jié)合,是抗體專(zhuān)一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
    IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個(gè)區(qū)段,其中兩個(gè)相同的區(qū)段稱(chēng)抗原結(jié)合片段(Fab)。每個(gè)Fab都保存結(jié)合抗原的能力,但只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn),是單價(jià)的,與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀。另一區(qū)段稱(chēng)Fc段,無(wú)抗體活性,但具有IgG*的抗原性。
    IgG可被胃蛋白酶分解為兩個(gè)片段,一個(gè)Fab雙體,稱(chēng)F(ab')2,能和兩個(gè)相同的抗原結(jié)合;另一片段類(lèi)似Fc,隨后被分解成小分子多肽,無(wú)生物活性。
    IgM是由五個(gè)單體組成的五聚體,含 10個(gè)重鏈和10個(gè)輕鏈,具有10個(gè)抗原結(jié)合價(jià),由于空間位置的影響,只表現(xiàn)為五個(gè)抗原結(jié)合價(jià)。IgM分子量約為900000,IgG分子量約為150000。
    機(jī)體被微生物感染后,先產(chǎn)生IgM抗體,然后產(chǎn)生IgG抗體。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間,IgM抗體量逐漸減少而消失,而IgG抗體可長(zhǎng)期存在,在疾病*后可持續(xù)數(shù)年之久。
    IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測(cè)定,對(duì)某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價(jià)值。 

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