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1.無菌環(huán)境
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞系的首要條件。細(xì)胞系在活體內(nèi),解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,但細(xì)胞系在體外培養(yǎng)的過程中,缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞系能在體外環(huán)境中生長繁殖,必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。
常見的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無致死毒性,可與細(xì)胞系長期共存,對細(xì)胞系有潛在影響,但體積小,不易鑒別,可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測。細(xì)菌增殖快,在短時間內(nèi)即可大量擴增,并產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞系。真菌的種類繁多,肉眼可見,漂浮于培養(yǎng)液面上,可呈絲狀、管狀或樹枝狀等。
2. 合適的溫度
一般哺乳類與禽類細(xì)胞系在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃,不適宜的環(huán)境溫度會影響細(xì)胞系的生長。細(xì)胞系對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力,在低溫下,細(xì)胞系的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃,雖然細(xì)胞系代謝受到影響,但無損傷作用;25~35℃時,細(xì)胞系以緩慢的速度生長;但若被置于40℃數(shù)小時,則不僅不利于細(xì)胞系生存、生長,甚至可導(dǎo)致其死亡。
3.氣體環(huán)境與pH
細(xì)胞系的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,氧氣、二氧化碳是細(xì)胞系生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞系的三羧酸循環(huán),為細(xì)胞系生存、代謝與合成提供能量;二氧化碳既是細(xì)胞系的代謝產(chǎn)物,是細(xì)胞系生長的必需成分,又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞系適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開放式培養(yǎng)中,以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。
4. 適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會引起細(xì)胞系發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此,滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞系的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞系對滲透壓都有一定的耐受能力,實際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞系。
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